1、產(chǎn)品簡介

       在蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析中，蛋白質(zhì)混合物是如此復(fù)雜，低豐度的蛋白質(zhì)的信號往往會被高豐度的蛋白質(zhì)的信號掩蓋丟失。從電泳凝膠中切除蛋白質(zhì)條帶進行提取很難得到足夠的蛋白質(zhì)。因此，對復(fù)雜樣本進行有效的分離以進行深入的蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析是關(guān)鍵。

       分析前如何降低樣品的復(fù)雜程度、獲得完整蛋白質(zhì)、富集低豐度蛋白質(zhì)、降低高豐度蛋白質(zhì)對低豐度蛋白質(zhì)的干擾、保留蛋白質(zhì)的各種翻譯后修飾狀態(tài)、提高樣品處理通量等，已成為蛋白質(zhì)樣品制備方法的重要前提。

       英國Expedeon公司推出了一套新型的微量蛋白制備電泳儀— Gelfree 8100 Fractionation System。該系統(tǒng)使用凝膠洗脫液相組分截留電泳技術(shù)（Gel Elution Liquid Fraction Entrapment Electrophoresis），基于蛋白質(zhì)分子量的不同，對完整蛋白質(zhì)進行分離，使用移液器在收集室吸取分離出來的蛋白質(zhì)。

       該系統(tǒng)能同時運行8個樣品，按蛋白質(zhì)的分子量來進行分離，分離的質(zhì)量范圍：3.5kDa—500kDa。相對于其它傳統(tǒng)分組方法，具有上樣量大、重現(xiàn)性好、分辨率高、回收率高、分離速度快和操作簡單的優(yōu)點。能增大蛋白質(zhì)組分析的覆蓋范圍，改善后期質(zhì)譜分析的結(jié)果，提高蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果的可信度。

2、特點及應(yīng)用

◆ 基于分子量的不同對完整蛋白質(zhì)進行分離純化，收集;

◆ 蛋白質(zhì)樣品在液相中回收，避免了傳統(tǒng)電泳凝膠的染色和條帶或點位切割步驟;

◆ 蛋白質(zhì)分離范圍高達3.5kDa—500kDa;

◆ 可同時進行1-8個樣品分離;

◆ 用戶可根據(jù)需要自行設(shè)置蛋白質(zhì)分離程序，分離純化特定的目標蛋白;

◆ 樣品容量大，是普通一維電泳的5倍以上，有利于富集低豐度蛋白質(zhì);

◆ 回收率高，>80%;

◆ 重現(xiàn)性好，CV<15%;

◆ 分離過程不受蛋白質(zhì)疏水性或等電點的影響,這就意味著你幾乎覆蓋整個蛋白質(zhì)組。

◆ 簡化蛋白質(zhì)組成的復(fù)雜程度，便于使用LC-MS/MS進行蛋白質(zhì)組學(xué)研究;

◆ 蛋白質(zhì)回收后保留其完整性，便于進行蛋白質(zhì)組學(xué)研究的完整定性;

◆ 蛋白質(zhì)回收后在溶液內(nèi)消化，免去了費時的膠內(nèi)消化步驟;

◆ 特別適合為LC-MS/MS、MALDI-TOF或免疫印跡等分析方法制備樣品。

3、工作流程

       Gelfree 8100有8個通道，每個通道有一個精確的凝膠柱，柱前面有一個樣品裝載室，柱后是一個餾分收集室。可以在任何時候使用1-8個通道。樣品被加入到樣品裝載室，施加電流，每個通道的帶電分子沿著柱狀凝膠移動。洗脫的蛋白收集在一個固定的液體體積內(nèi)。在預(yù)先設(shè)定的時間間隔內(nèi)，儀器會自動暫停，以方便地用吸液管移走液體餾分。為了收集下一個分子量的餾分，序列重新啟動，過程繼續(xù)。

       樣品和樣品緩沖液混合后加入到上樣槽內(nèi)，蛋白質(zhì)經(jīng)過先濃縮再分離的過程，在分離膠內(nèi)，較小的蛋白質(zhì)移動更快，分離的蛋白先后進入到收集槽內(nèi)，被分別收集起來，如下圖所示：

上樣

濃縮

分離

收集純品

       Gelfree 8100蛋白制備電泳儀和質(zhì)譜結(jié)合時，制備蛋白質(zhì)樣品的操作流程：

電泳槽套盒：

       含8個獨立通道，可同時或分別使用1—8個通道，處理1—8個樣品，四種電泳槽套盒供選擇。